時間：2022-11-07 
瀏覽量： 1381 分光光度法的實驗原理是物質(zhì)與光作用，具有選擇吸收的特性。有色物質(zhì)的顏色是該物質(zhì)與光作用產(chǎn)生的。即有色溶液所呈現(xiàn)的顏色是由于溶液中的物質(zhì)對光的選擇性吸收所致。
由于不同的物質(zhì)其分子結(jié)構(gòu)不同，對不同波長光的吸收能力也不同，因此具有特征結(jié)構(gòu)的結(jié)構(gòu)集團，存在選擇吸收特性的最大實收波長，形成最大吸收峰，而產(chǎn)生特有的吸收光譜。即使是相同的物質(zhì)由于其含量不同，對光的吸收程度也不同。
分光光度法利用物質(zhì)所特有的吸收光譜來鑒別物質(zhì)的存在（定性分析），或利用物質(zhì)對一定波長光的吸收程度來測定物質(zhì)含量（定量分析）。
分光光度法的實驗原理是：
1、光度法測定的條件：分光光度法測定物質(zhì)含量時應注意的條件主要是顯色反應的條件和測定吸光度的條件。顯色反應的條件有顯色劑的用量，介質(zhì)的酸度、顯色時溫度、顯色時間及干擾物質(zhì)的消除方法等；測量吸光度的條件包括入射光波長的選擇、吸光度范圍和參比溶液等。
2、二氮雜菲-亞鐵絡合物：鄰二氮雜菲是測定微量鐵的一種較好的試劑。在pH=2～9的條件下Fe2+離子與鄰二氮雜菲生成穩(wěn)定的橘紅色絡合物，此絡合物的lgK穩(wěn)=21.3,摩爾吸光系數(shù)ε510=1.1×104 在顯色前，首先用鹽酸羥胺把Fe3＋離子還原為Fe2＋離子，其反應式如下：
2Fe3＋+2NH2OH·HCl→2Fe2＋+N2+2H2O+4H++2Cl-
測定時，控制溶液酸度在pH=5左右較為適宜。酸度過高，反應進行較慢；酸度太低，則Fe2+離子水解，影響顯色。
Bi3+，Cd2+，Hg2+，Ag+，Zn2+等離子與顯色劑生成沉淀，Ca2+，Cu2+，Ni2+等離子與顯色劑形成有色絡合物。
因此當這些離子共存時，應注意它們的干擾作用。
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