分光光度計(jì)的基本工作原理是基于物質(zhì)對(duì)光(對(duì)光的波長(zhǎng))的吸收具有選擇性,不同的物質(zhì)都有各自的吸收光帶,所以,當(dāng)光色散后的光譜通過某一溶液時(shí),其中某些波長(zhǎng)的光線就會(huì)被溶液吸收。在一定的波長(zhǎng)下,溶液中物質(zhì)的濃度與光能量減弱的程度有一定的比例關(guān)系,即符合比爾定律。
T=I/Iolg(Io/I)=εcb
式中,T為透過率,Io為入射光強(qiáng)度,I為透射光強(qiáng)度,A為消光值(吸光度),ε為吸收系數(shù),b為溶液的光徑長(zhǎng)度,c為溶液的濃度。從以上公式可以看出,當(dāng)入射光、吸收系數(shù)和溶液厚度一定時(shí),透光率是根據(jù)溶液的濃度而變化的。
分光光度計(jì)已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器。常用于核酸,蛋白定量以及細(xì)菌生長(zhǎng)濃度的定量